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彗星試驗的原理是怎樣的?

更新時間:2022-01-17      點擊次數(shù):3616
  彗星實驗也稱單細胞凝膠電泳試驗,是一種有效評估DNA損傷的方法。其原理是器官或組織經(jīng)處理(如輻射、重金屬等)后,細胞中的DNA發(fā)生單鏈或雙鏈斷裂,經(jīng)細胞及其核膜裂解后,DNA解旋,在電場作用下,DNA斷片遷移出細胞核,形成彗星狀的電泳圖譜。正常細胞的大分子DNA在電場作用下遷移距離較短,DNA仍保留在細胞核的范圍,形成圓形或輕微拖尾的圖譜。根據(jù)電泳緩沖液的pH值不同,可分為中性彗星實驗(pH=8.4)和堿性彗星實驗(pH>13)。中性彗星實驗主要用于檢測DNA雙鏈的斷裂損傷,堿性彗星實驗具有更高的靈敏性,可用于檢測更少量的單鏈和雙鏈斷裂損傷。

 

彗星試驗
 

 

  需要注意的是,試驗過程中的個方面,包括樣品準(zhǔn)備、電泳條件、視覺分析參數(shù)(如染色強度、顯微鏡光強度以及使用顯微鏡濾鏡和相機動態(tài)和環(huán)境條件(如背景照明)已經(jīng)被研究,可能影響DNA遷移。
  每個實驗室都應(yīng)證明能夠為所使用的目標(biāo)組織獲得足夠質(zhì)量的單細胞或細胞懸浮液,從而在彗星試驗(cometassay)中建立實驗?zāi)芰?。匯智泰康擁有多年毒理學(xué)服務(wù)與產(chǎn)品研發(fā)經(jīng)驗,針對不同遺傳毒性試驗開發(fā)針對試劑盒,包括彗星試驗試劑盒。首先通過%尾DNA的評價,對照處理組動物%尾DNA在低范圍內(nèi)。目前的數(shù)據(jù)表明,尾部DNA百分比(基于平均中位數(shù))在大鼠肝臟應(yīng)該最好不要超過6%,這將是符合JaCVAM驗證試驗的值和其他出版和私有數(shù)據(jù)。目前還沒有足夠的數(shù)據(jù)對其他組織的最佳或可接受范圍提出建議。這并不排除合理使用其他組織。測試報告應(yīng)根據(jù)已發(fā)表的文獻或?qū)S袛?shù)據(jù),對彗星試驗在這些組織中的性能進行適當(dāng)?shù)膶彶?。首先,在對照組中,需要一個較低的%尾DNA范圍,以提供足夠的動態(tài)范圍來檢測陽性的影響。其次,每個實驗室都應(yīng)能夠按照不同方式,對直接誘變劑和促進劑的反應(yīng)。
 
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